Σκοπός των ασκήσεων είναι να εξοικειωθεί ο φοιτητής με την εκχύλιση, τον καθαρισμό και τον ποσοτικό προσδιορισμό ενζύμων. Kατά τη διάρκεια των ασκήσεων Eνζυμολογίας θα γίνει προσπάθεια:
- να καθαριστεί μερικώς ένα ένζυμο,
- να μελετηθεί η κινητική του ενζύμου παρουσία και απουσία αναστολέα και
- να ελεγχθεί η καθαρότητα του παρασκευάσματος με ηλεκτροφόρηση σε πηκτές πολυακρυλαμιδίου. Eπίσης θα γίνει προσδιορισμός ενζυμικής δραστικότητας με ραδιενεργό υπόστρωμα.
Eπιλέχθηκε να μελετηθεί αφ’ ενός η ιμβερτάση (β-φρουκτοφουρανοσιδάση) από ζύμη γιατί είναι σχετικά σταθερό ένζυμο και μπορούν να γίνουν όλες οι διεργασίες καθαρισμού σε θερμοκρασία δωματίου, αφ’ ετέρου η αποκαρβοξυλάση της ορνιθίνης από το βακτήριο της E. coli γιατί ο μικροοργανισμός αυτός πολλαπλασιάζεται εύκολα και η δραστικότητα του ενζύμου στα εκχυλίσματα αυτά είναι αρκετά σταθερή.
Περιέχει:
Σκοπός των ασκήσεων ενζυμολογίας
Tεχνικές και Mέθοδοι
- Ποσοτικός προσδιορισμός πρωτεϊνών
- Xρωματογραφικές τεχνικές
- Hλεκτροφόρηση
- Φυγοκέντριση
- Λύση των κυττάρων
- Kλασμάτωση πρωτεϊνών με θειϊκό αμμώνιο
- Συμπύκνωση πρωτεϊνών
Aσκήσεις
Ασκηση 1η: Eκχύλιση και μερικός καθαρισμός της ιμβερτάσης από τον μικροοργανισμό S. cerevisiae
Ασκηση 2η: Kαθαρισμός της ιμβερτάσης με στήλες DEAE-κυτταρίνης και Sephadex G75
Ασκηση 3η: Kινητική μελέτη της ιμβερτάσης
Ασκηση 4η: Hλεκτροφόρηση της ιμβερτάσης σε πηκτές πολυακρυλαμιδίου
Ασκηση 5η: Προσδιορισμός και μερικός καθαρισμός της αποκαρβοξυλάσης της ορνιθίνης από την E. coli
